鸡Prnp基因原核表达载体的构建及其在大肠埃希菌中的表达

作     者：李仙春 芦艳 毛耀芳 杨海峰 余海山 马永华 万学瑞 LI Xianchun;LU Yan;MAO Yaofang;YANG Haifeng;YU Haishan;MA Yonghua;WAN Xuerui

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 西北师范大学国有资产管理处甘肃兰州730070 

基　　金：甘肃省自然科学基金(18JR3RA167) 甘肃农业大学学科建设专项基金(GUA-XKJS-2018-073) 甘肃农业大学人才专项经费项目(2017RCZX-11) 甘肃农业大学青年导师基金(GAU-QDFC-2020-11) 

出 版 物：《浙江农业学报》 (Acta Agriculturae Zhejiangensis)

年 卷 期：2020年第32卷第12期

页      码：2138-2146页

摘      要：试验旨在构建鸡Prnp基因原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,为制备鸡朊蛋白单克隆抗体提供材料。根据GenBank已报道的鸡Prnp基因组序列和pET-28a质粒多克隆位点设计引物,以健康的鸡全血基因组DNA为材料,采用PCR的方法扩增鸡的Prnp基因,将目的基因片段与pET-28a载体连接,构建重组原核表达载体。重组菌转化到*** BL21(DE3)感受态细胞中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达的重组蛋白。结果表明,重组蛋白在诱导剂的终浓度为0.08 mmol·L^-1,16℃,220 r·min^-1诱导7 h,蛋白表达量最高。综上所述,本研究成功构建了pET-28a-Ch Prnp重组表达菌株,为Prnp朊蛋白的结构、生理功能和致病机制研究提供方法。

主 题 词：鸡 Prnp基因 重组表达载体 原核表达 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-1524.2020.12.04

馆 藏 号：203100060...