人内毒素结合肽基因的突变及突变体蛋白表达

作     者：孙亚丽 刘友生 王长松 SUN Ya-li;LIU You-sheng;WANG Chang-song

作者机构：第三军医大学西南医院病理研究所重庆400038 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.30271342) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2006年第19卷第1期

页      码：21-23,27页

摘      要：目的分析亲代人内毒素结合肽一级结构,选择可能影响其生物学活性的氨基酸对应碱基位点进行突变,克隆基因突变体mEBP基因并研究其蛋白表达。方法以亲代EBP基因为基础,结合DNASIS软件理化性质分析确定突变碱基,应用PCR定点诱变技术进行第5、18位谷氨酰胺→赖氨酸的定点突变。并将其克隆至原核融合表达载体pinpointXa-3,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS进行表达,经Western blot鉴定。结果突变EBP基因13及52位核苷酸由C突变为A,构建的阳性重组子经酶切及测序鉴定证实与设计序列完全一致,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达生物素化的融合蛋白,Western blot鉴定显示能与抗生物素单克隆抗体结合。结论已成功获得EBP基因突变体,并在大肠杆菌以融合蛋白的形式进行表达。

主 题 词：内毒素结合肽 突变 蛋白表达 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13200/j.cjb.2006.01.26.sunyl.006

馆 藏 号：203100343...