抗CD20嵌合抗体的表达与活性检测

作     者：师明磊 胡显文 陈惠鹏 高丽华 李世崇 SHI Ming-lei;HU Xian-wen;CHEN Hui-peng;GAO Li-Hua;LI Shi-Chong

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100071 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2005年第25卷第7期

页      码：34-39页

摘      要：表达了基因重组抗CD20嵌合抗体并对其生物学活性进行了初步鉴定。设计合成轻、重链可变区序列;提取血液RNA,通过RT-PCR得到人κ、IgG1的轻、重链恒定区序列。运用重叠延伸PCR,连接可变区与恒定区,将轻、重链基因连接至pIRES双表达载体。将质粒以阳离子脂质体转染CHO细胞,ELISA挑选阳性克隆,共获得7株表达较高的克隆,表达量约为2mg/L。扩大培养阳性克隆anti-CD20-1B3,收获上清,以蛋白A进行亲和层析纯化表达蛋白。SDS-PAGE检测表明纯化纯度达到95%,蛋白相对分子量与理论值吻合。以CD20+细胞Raji、Daudi、Ramous检测,表明该抗体能与CD20抗原特异性结合,体外杀伤试验说明抗体能够杀伤CD20+淋巴瘤细胞。

主 题 词：嵌合抗体 活性检测 SDS-PAGE检测 RT-PCR 阳性克隆 生物学活性 重链可变区 双表达载体 CHO细胞 脂质体转染 ELISA 相对分子量 特异性结合 初步鉴定 基因重组 设计合成 IgG1 重链基因 扩大培养 层析纯化 RNA 阳离子 表达量 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20050706

馆 藏 号：203100923...