RNA干扰对胶质瘤细胞垂体瘤转化基因影响的实验研究

作     者：荣良群 戴如飞 蔡军 闫志海 阎超 RONG Liang-qun;DAI Ru-fei;CAI Jun;YAN Zhi-hai;YAN Chao

作者机构：徐州医学院第二附属医院神经内科江苏徐州221006 

出 版 物：《解剖学研究》 (Anatomy Research)

年 卷 期：2010年第32卷第6期

页      码：422-425页

摘      要：目的构建表达靶向抑制PTTG基因的表达短发夹结构(shRNA)的RNA干扰载体。方法根据PTTG基因cDNA序列,设计针对PTTG基因的3组干扰序列,并设计1组阴性对照序列,克隆到真核表达载体pGenesil-1中,进行酶切鉴定和测序鉴定。将构建好的4组重组质粒分别命名为PTTG-1组,PTTG-2组,PTTG-3组、阴性对照NC(negativecontrol)组。利用RNA干扰技术,将以上shRNA分别转染细胞中,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTTGmRNA表达水平、Western blot检测PTTG蛋白表达水平。结果构建的PTTG RNA干扰序列和阴性对照序列经基因测序证明序列正确。细胞在转染PTTG干扰载体后,提取细胞的总RNA,经RT-PCR电泳发现,在转染24 h后,PTTG-2、PTTG-3即显示出抑制作用,PTTGmRNA表达水平降低,PTTG-1组对目的基因的抑制作用不明显;在转染48 h后,各组均显示出抑制作用,但PTTG-3的抑制作用更明显;转染72 h后,PTTG-1组有微弱的抑制作用,PTTG-2及PTTG-3组仍有显示明显的抑制作用,但PTTG-3抑制作用较PTTG-2更强烈。Western blot检测不同时间PTTG蛋白的变化显示,在转染24 h后,PTTG-1、PTTG-2、PTTG-3组对目的基因的抑制作用均不明显;在转染48 h后,PTTG-1、PTTG-2、PTTG-3组均显示出抑制作用,但PTTG-3的抑制作用更明显;转染h小时后,PTTG-1组没有抑制作用,PTTG-2及PTTG-3组仍有显示明显的抑制作用,但PTTG-3抑制作用较PTTG-2更强烈。结论成功构建了靶向抑制PTTG基因的表达短发夹结构(shRNA)的RNA干扰载体,并筛选了干扰效果最强的序列,为进一步实验打下了基础。

主 题 词：RNA干扰 垂体瘤转化基因 胶质瘤细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203101074...