RNA干扰对子宫内膜癌HEC-1A细胞PTTG影响的研究

作     者：张曙萱 刘永利 袁丽萍 ZHANG Shu-xuan;LIU Yong-li;YUAN Li-ping

作者机构：徐州市第一人民医院妇产科江苏徐州221000 

基　　金：徐州市科技发展基金资助项目(XM09B054) 

出 版 物：《中国妇幼健康研究》 (Chinese Journal of Woman and Child Health Research)

年 卷 期：2011年第22卷第6期

页      码：760-764页

摘      要：目的 建立靶向垂体瘤转化基因（PTTG）干扰RNA质粒表达载体,观察对子宫内膜癌HEC-1A细胞PTTG的影响.方法 根据PTTG基因设计3对干扰序列,合成特异性干扰PTTG的siRNA片段,并与pSilencer3.0-Hl载体连接,构建3个PTTG干扰载体（pSilencer3.0-Hl-PTTG-siRNA）,分别命名为PTTG siRNA-1、PTTG siRNA-2、PTTG siRNA-3.利用脂质体将其转染子宫内膜癌系HEC-1A细胞,以带有绿色荧光蛋白的真核表达质粒pSilencer3.0-Hl作为转染效率测定组,免疫荧光技术检测转染效率;应用RT-PCR 及Western blot分别检测PTTG mRNA和蛋白表达水平.结果 序列分析法证明构建pSilencer3.0-Hl-PTTG-siRNA质粒成功;RT-PCR和Western-blot分析表明PTTG siRNA-2在mRNA水平和蛋白水平特异性抑制PTTG基因的表达最强.结果 显示HEC-1A细胞阴性对照组荧光表达百分率约为5.3%,转染组荧光表达百分率为74.9%,瞬时转染效率约为69.6%,已经可以满足实验需要.结论 成功构建了靶向抑制PTTG基因的siRNA干扰载体,筛选了干扰效果最强的序列,为进一步实验打下了基础.

主 题 词：RNA干扰 垂体瘤转化基因 真核表达质粒 子宫内膜癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-5293.2011.06.015

馆 藏 号：203101118...