靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒在HEK293细胞中的复制

作     者：吕延成 潘晓瑜 周丹丹 袁俊杰 黄畅 

作者机构：遵义医学院珠海校区生化教研室广东省珠海519040 

基　　金：贵州省科学技术基金(黔科合J字No.2313号) 贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目(黔省专合字No.(2009)122号)资助 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：2013年第29卷第8期

页      码：759-766页

摘      要：按照shRNA(small hairpin RNA)设计原则,针对Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type2,HSV-2)的UL27基因序列保守区域筛选设计、合成4条干扰靶序列并构建表达UL27序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pGPU6/GFP/Neo.通过脂质体介导重组表达载体转染HEK293细胞(human embryonic kidney 293 cell)再接种HSV-2.采用实时荧光定量PCR(real-timefluorescent quantitative PCR)技术检测UL27各组的mRNA转录水平,终点滴定法检测细胞上清液中的病毒滴度,四甲基偶氮唑盐(four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,Western印迹法检测蛋白表达效果.结果显示,UL27shRNA75组对UL27基因mRNA表达抑制效果最佳,同时能显著抑制感染细胞的CPE(cytopathic effect,CPE),降低上清液中的病毒感染滴度,提高细胞的生存率,抑制UL27基因的蛋白表达.提示本研究构建的pGPU6/GFP/Neo-UL27表达载体能在细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL27基因表达,抑制HSV-2在HEK293细胞中复制.

主 题 词：RNA干扰 Ⅱ型单纯疱疹病毒 UL27基因 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.13865/j.cnki.cjbmb.2013.08.006

馆 藏 号：203101190...