可复制型抗乙肝免疫基因治疗剂pSVK-HBVE的构建与表达

作     者：侯沙沙 高燕 王宇 武帅 朱晓明 郭炳冉 张巍 徐元基 阎瑾琦 于继云 

作者机构：军事医学科学院基础医学研究所北京100850 曲阜师范大学生命科学学院273165 北京交通大学理学院100044 

基　　金：国家自然科学基金(31100655) 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2014年第30卷第9期

页      码：816-820页

摘      要：目的构建能同时表达抗体小分子靶向干扰素(dsFvα)和人白介素12(hIL-12)的可复制型抗乙肝免疫基因治疗质粒pSVK-HBVE。方法将pVAX-HBVE质粒双酶切,回收dsFvα-IRES-hIL12片段;将dsFvα-IRES-hIL12片段克隆入早期构建的pSVK载体,得到重组质粒pSVK-HBVE。将重组质粒瞬时转染到293T细胞,ELISA法检测目的基因表达;提取重组质粒pSVKHBVE,注射乙肝转基因小鼠腿部肌肉并采用电穿孔递送,定量PCR检测注射前后转基因小鼠体内HBV基因拷贝数的变化。结果pSVK-HBVE经酶切和测序分析与预期设计完全一致,显示重组质粒构建成功;ELISA检测显示dsFvα和IL-12基因在细胞上清中获得表达;注射重组质粒pSVK-HBVE 30μg仅1次即可使转基因小鼠体内的HBV基因拷贝数降低2个数量级。结论成功构建能够同时表达抗体靶向干扰素(dsFvα)和hIL-12的可复制型抗乙肝免疫基因治疗质粒,为慢性乙肝免疫基因治疗提供新的备选方案。

主 题 词：乙肝 复制型 dsFv IFN-α hIL-12 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13431/j.cnki.immunol.j.20140179

馆 藏 号：203101255...