人源类溶菌酶蛋白6在毕赤酵母中的重组表达及活性分析

作     者：黄鹏 李文姝 谢君 鲍建瑛 曹晓娥 余龙 徐一新 HUANG Peng;LI Wen-shu;XIE Jun;BAO Jian-ying;CAO Xiao-e;YU Long;XU Yi-xin

作者机构：上海健康医学院基础医学院上海200237 上海纽约大学文理学部上海200122 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200433 上海健康医学院药学院上海200237 

基　　金：上海市自然科学基金(15ZR1421800) 上海市高校青年教师资助培养计划(PF-JZ-QT02022016)资助项目 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2015年第35卷第8期

页      码：30-37页

摘      要：利用毕赤酵母(Pichia pastoris)重组表达人源类溶菌酶蛋白6(human lysozyme-like protein6,h Lyzl6),对其酶学性质进行分析。根据毕赤酵母密码子偏爱性设计并人工合成h Lyzl6基因,将其连接至含有乙醇氧化酶启动子(AOX1)的p PIC9K质粒构建重组表达载体p PIC9K-hlyzl6;重组表达载体经线性化后电转化入毕赤酵母GS115感受态细胞,经G418筛选获得高拷贝重组菌株后进行甲醇诱导表达。经甲醇诱导72 h后发酵液上清中酶活性达到最高值,发酵液上清经SDSPAGE检测在14.8 k Da处有重组h Lyzl6蛋白条带,分子量符合预期,通过甲壳素亲和层析可对其进行纯化;采用比浊法测定h Lyzl6酶学活性,结果表明h Lyzl6对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)有较好的杀灭作用,最适反应温度为40℃,最适p H为5.5,其酶活力为54 700U/mg,Cu2+对其活性有明显抑制,EC50为30.2799 mg/L。采用基因工程方法首次在毕赤酵母GS115成功表达了重组h Lyzl6,证实其在体外具有杀菌活性,初步揭示h Lyzl6在男性生殖系统先天性免疫中发挥了一定作用,为进一步研究h Lyzl6的功能和应用开发奠定了基础。

主 题 词：人源类溶菌酶蛋白6 毕赤酵母 表达 杀菌活性 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20150805

馆 藏 号：203101289...