木麻黄SSR-PCR反应体系的建立与优化

作     者：李振 仲崇禄 张勇 魏永成 孟景祥 LI Zhen;ZHONG Chong-Lu;ZHANG Yong;WEI Yong-Cheng;MENG Jing-Xiang

作者机构：中国林业科学研究院热带林业研究所广州510520 南京林业大学南京210037 

基　　金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(CAFYBB2018ZB003) 国家自然科学基金项目(31770716) 

出 版 物：《植物研究》 (Bulletin of Botanical Research)

年 卷 期：2021年第41卷第2期

页      码：312-320页

摘      要：为得到木麻黄SSR-PCR反应的最佳体系,以4个种(短枝木麻黄、山地木麻黄、粗枝木麻黄、细枝木麻黄)的24个无性系为材料,采用L_(16)(4^(5))正交设计对影响木麻黄SSR-PCR反应的4个因素(Taq酶、dNTP、Mg^(2+)和引物)在4个水平上进行了优化,并利用直观分析和方差分析两种方法对PCR结果进行评价。结果表明:引物、Mg^(2+)和dNTP均对木麻黄SSR-PCR反应结果有极显著的影响(PMg^(2+)>dNTP,而Taq酶对扩增结果无显著影响;确定了两种木麻黄SSR-PCR反应体系(体系6和体系15),体系6为1×PCR buffer、2ng模板DNA、0.5μmol·L^(-1)引物、1.5 mmol·L^(-1) Mg^(2+)、0.1 mmol·L^(-1) dNTP、0.5 U Taq酶;体系15为1×PCR buffer、2ng模板DNA、0.5μmol·L^(-1)引物、1.75 mmol·L^(-1) Mg^(2+)、0.2 mmol·L^(-1) dNTP、1.25 U Taq酶,反应体系共10μL,不足部分用ddH2O补足。从节约成本和降低非特异性产物的角度考虑可将体系6作为最佳体系,体系15为备用体系;本试验所选荧光引物M26、M36的退火温度在52~62℃均可扩增出清晰明亮的条带。为简化操作步骤和减少非特异性产物,可选择60℃作为引物M26、M36的最佳退火温度。

主 题 词：木麻黄 SSR-PCR反应体系 正交设计 

学科分类：0907[农学-草药学] 08[工学] 0829[工学-安全科学与工程类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.7525/j.issn.1673-5102.2021.02.019

馆 藏 号：203101663...