马铃薯S病毒RT-qPCR通用检测体系的建立与应用

作     者：程胜群 吕文河 高艳玲 白艳菊 范国权 张威 张抒 邱彩玲 申宇 董学志 白雅梅 CHENG Shengqun;Lü Wenhe;GAO Yanling;BAI Yanju;FAN Guoquan;ZHANG Wei;ZHANG Shu;QIU Cailing;SHEN Yu;DONG Xuezhi;BAI Yamei

作者机构：东北农业大学农学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省农业科学院马铃薯研究所黑龙江哈尔滨150086 东北农业大学资源与环境学院黑龙江哈尔滨150030 

基　　金：黑龙江省农业科学院院级科研项目(2018YYYF022) 农业部国家马铃薯产业技术体系(CARS-09-P16) 黑龙江省马铃薯产业技术协同创新推广体系(2020) 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2020年第35卷第6期

页      码：187-194页

摘      要：为实现准确和快速鉴定PVS及其株系,明确PVS在马铃薯叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎中含量以筛选适合的检测部位,设计PVS通用简并引物,建立实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术体系,分析熔解曲线鉴定PVS^(O)和PVS^(A)株系。以马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)阳性样品为对照检测其特异性。应用PVS^(O)和PVS^(A)重组质粒分别建立标准曲线,检测接种PVS^(O)和PVS^(A)马铃薯品种尤金和冀张薯12号的5个部位PVS含量。另外,应用该体系检测来源于11个省(市、自治区)的90个PVS阳性样品验证其实用性。PVS^(O)和PVS^(A)扩增后熔解曲线分别在85.77~86.00℃和87.78~87.91℃出现特异峰,PVS阴性样品及PVX、PVY、PVM、PVA和PLRV阳性样品的熔解曲线均无上述特异峰。PVS^(O)和PVS^(A)的标准曲线重组质粒浓度分别在1.09×105~1.09×10^(9)拷贝/μL和1.26×10^(5)~1.26×10^(9)拷贝/μL时,荧光信号基线的循环数平均值(Cycle threshold,Ct值)与PVS病毒粒子拷贝数对数之间具有良好的线性关系(决定系数R2=0.9942和0.9912)。尤金和冀张薯12号5个部位PVS^(O)和PVS^(A)拷贝数均大于107数量级,均可用于检测,以PVS^(O)在叶柄中含量最高。11个省(市、自治区)的90个PVS阳性样品均可检测到。本研究建立的PVS RT-qPCR检测体系快速、准确、特异,并可依据样品熔解曲线鉴定PVS^(O)和PVS^(A)株系。叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎等5个部位组织均可用于检测,实用性强,可为生产脱毒种薯提供技术支持。

主 题 词：马铃薯S病毒 株系 RT-qPCR 检测 种薯 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 0901[农学-植物生产类] 090401[090401] 

核心收录：

D　O　I：10.7668/hbnxb.20191131

馆 藏 号：203101683...