融合蛋白TAT-EGFP的表达及其对膀胱癌细胞和组织的穿膜活性鉴定

作     者：吴刚 周洁 王启辉 聂振 WU Gang;ZHOU Jie;WANG Qi-hui;NIE Zhen

作者机构：广西医科大学研究生学院南宁市530021 广西医科大学第一附属医院泌尿外科南宁市530021 广西医科大学基础医学院免疫教研室南宁市530021 

基　　金：国家自然科学基金(30700836 81160314) 

出 版 物：《广西医学》 (Guangxi Medical Journal)

年 卷 期：2012年第34卷第6期

页      码：653-656页

摘      要：目的构建穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白(TAT-EGFP)融合蛋白的原核表达系统,研究该融合蛋白在体外对人膀胱癌细胞(EJ细胞)和膀胱癌组织的跨膜作用。方法以pEGFP-1载体为模板,设计包含TAT序列的引物,用PCR技术扩增TAT-EGFP基因,扩增产物插入载体pET30a,构建成重组质粒pET30a-TAT-EGFP。将重组质粒转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导TAT-EGFP融合蛋白表达。表达产物用十二烷基硫钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,Ni-NTA Superflow Cartvidge亲和层析柱纯化融合蛋白。将融合蛋白TAT-EGFP加入培养的EJ细胞和膀胱癌组织,荧光显微镜观察TAT-EGFP融合蛋白进入EJ细胞和膀胱癌组织的情况。结果成功构建了高表达pET30a-TAT-EGFP重组子,纯化了分子质量约为31 kD的融合蛋白TAT-EGFP。不同浓度的TAT-EGFP融合蛋白对膀胱癌细胞均无明显毒性。TAT-EGFP融合蛋白具有穿过膀胱癌细胞和膀胱癌组织的作用。结论通过对TAT-EGFP融合蛋白表达纯化及活性分析,证实TAT的蛋白转导作用,为肽类及生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供了理论基础。

主 题 词：穿膜肽-增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白 穿膜 人膀胱癌细胞 膀胱癌组织 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0253-4304.2012.06.001

馆 藏 号：203101759...