荧光定量PCR检测TRECs的标准品质粒和标准曲线的构建

作     者：李红兵 陈明 朱学文 汪莉萍 葛国洪 李秀华 

作者机构：徐州医学院附属医院感染病科陕西渭南市中心医院221002 

基　　金：江苏省科委社会发展计划基金资助项目(BS2004014) 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2008年第34卷第2期

页      码：173-175页

摘      要：目的构建荧光定量PCR检测T细胞受体重排切除环（TRECs）的标准品质粒和标准曲线。方法对TCRδ基因进行序列分析，设计一对引物和探针。提取正常人外周血单个核细胞中的DNA，经普通PCR扩增，产物纯化后与pUCM-T载体连接并转化入大肠杆菌DH5α，筛选得到重组成功的质粒。结果重组质粒测序后显示目的片段序列正确，表明TRECs基因片段成功克隆。以10^3～10^7copies／ml不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增后，统计学分析显示标准品浓度的对数与Ct值之间存在良好的线性关系（r=-0．998，P＜0．01）。结论所构建的TRECs标准品特异性和线性关系较好。

主 题 词：聚合酶链反应 T细胞受体重排切除环 标准曲线 质粒 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0253-3685.2008.02.026

馆 藏 号：203101945...