杜氏盐藻核基质附着区结合蛋白基因的克隆及原核表达

作     者：冯英才 王天云 王鹏举 刘红涛 刘兰琦 薛乐勋 FENG Yingcai;WANG Tianyun;WANG Pengju;LIU Hongtao;LIU Lanqi;XUE Lexun

作者机构：郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州450052 新乡医学院生物化学与分子生物学教研室新乡453003 

基　　金：国家自然科学基金资助项目30470030 

出 版 物：《郑州大学学报（医学版）》 (Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences))

年 卷 期：2008年第43卷第6期

页      码：1120-1123页

摘      要：目的:构建杜氏盐藻核基质附着区(MAR)结合蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化融合蛋白。方法:根据GenBank上杜氏盐藻MAR结合蛋白的cDNA全长序列设计出含有特定酶切位点的引物,PCR法获得MAR结合蛋白基因序列全长,将其克隆至载体pMD18-T中。酶切连接到pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-MBP,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,Western blotting检验其表达结果。结果:重组质粒经酶切、PCR、测序鉴定,成功构建了原核表达载体pET-MBP,对表达的融合蛋白的Western blotting分析结果表明表达的蛋白质为目的蛋白。Ni2+亲和层析法纯化蛋白质,纯化后目的蛋白在总蛋白中的含量约为70%。结论:成功地克隆杜氏盐藻MAR结合蛋白基因的全长并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,且纯化了MAR结合蛋白的融合蛋白。

主 题 词：杜氏盐藻 核基质附着区 核基质附着区结合蛋白 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-6825.2008.06.014

馆 藏 号：203101956...