介导人α-反义寡核苷酸慢病毒载体的构建

作     者：赖颖晖 赖永榕 杨高晖 LAI Ying-hui;LAI Yong-rong;YANG Gao-hui

作者机构：广西医科大学第一附属医院血液科广西南宁530021 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30860307) 广西研究生教育创新计划资助项目 

出 版 物：《中国实验诊断学》 (Chinese Journal of Laboratory Diagnosis)

年 卷 期：2010年第14卷第9期

页      码：1358-1362页

摘      要：目的构建介导人α-反义寡核苷酸的慢病毒载体,为α-反义寡核苷酸对β-地中海贫血基因治疗的体内试验提供稳定的转染细胞载体。方法根据人α-反义寡核苷酸序列设计siRNA、合成DNA片段,通过双限制性内切酶消化和连接的方法构建pGCSIL-vshRNA-GFP载体质粒,接着该质粒转化感受态的大肠杆菌***5α,通过PCR及基因测序鉴定阳性克隆,再经Lipofectamine 2000将pGCSIL-vshRNA-GFP,pHelper 1.0和pHelper 2.0三质粒系统共转染293 T细胞包装病毒,通过绿色荧光蛋白的表达测定收集的病毒滴度。结果重组质粒的外源基因PCR鉴定正确,基因测序结果与所需要的α-反义寡核苷酸序列完全一致,浓缩后病毒滴度为5×109TU/ml。结论成功构建介导人α-反义寡核苷酸的慢病毒载体。

主 题 词：慢病毒载体 反义寡核苷酸 基因治疗 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-4287.2010.09.004

馆 藏 号：203101992...