多房棘球绦虫钙网蛋白的真核表达及其T、B细胞表位预测

作     者：陈路娟 程喆 王彦海 赵利美 CHEN Lu-juan;CHENG Zhe;WANG Yan-hai;ZHAO Li-mei

作者机构：内蒙古科技大学包头医学院基础医学与法医学院病原生物学教研室内蒙古包头014060 厦门大学生命科学学院寄生动物研究室 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81860362) 内蒙古自治区自然科学基金项目(No.2018BS08013) 内蒙古自治区高等学校科学研究项目(No.NJZZ18185) 包头医学院博士科研启动基金项目(No.BSJJ201805) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2020年第15卷第12期

页      码：1397-1403页

摘      要：目的构建多房棘球绦虫钙网蛋白(EmCRT)的真核表达载体,鉴定重组EmCRT蛋白在Hela细胞中的表达,并对其进行T、B细胞表位预测等生物信息学分析。方法根据多房棘球绦虫钙网蛋白基因序列设计特异引物,以多房棘球绦虫原头蚴cDNA为模板,PCR扩增EmCRT基因片段。将此片段插入真核表达载体pcDNA3.3-HA,构建重组质粒pcDNA3.3-HA-EmCRT,并将PCR、酶切和测序鉴定正确的质粒转染Hela细胞,应用Western blot和细胞免疫荧光法检测重组EmCRT蛋白在细胞中的表达。利用ProtParam预测EmCRT的理化性质,SignalP 4.1 Server预测其信号肽序列,PSORT II Prediction预测其亚细胞定位,TMHMM 2.0预测其跨膜结构域,SOPMA和SWISS-MODEL预测其二、三级结构,DNAStar软件分析其亲水性、柔韧性、抗原指数以及表面可及性,并推测可能的B细胞表位;采用SYFPEUTHI的T细胞表位预测工具分别预测细胞毒性T细胞(CTL)和辅助T细胞(Th)表位。结果成功构建了EmCRT的真核表达载体,经Western blot和细胞免疫荧光检测EmCRT在Hela细胞中高效表达。EmCRT蛋白的相对分子质量为45.44×10^(3),等电点为4.47,预测该蛋白含有1个信号肽序列和1个跨膜区域,可能定位于细胞质,具有6个T、B细胞联合表位,分别为51-88 aa、112-154 aa、149-178 aa、185-198 aa、244-263 aa、280-309 aa。结论真核表达的重组多房棘球绦虫钙网蛋白相对分子质量为45.44×10^(3),预测含有T、B细胞表位,为高效抗多房棘球绦虫表位疫苗的研发奠定了基础。

主 题 词：多房棘球绦虫 钙网蛋白 真核表达载体 抗原表位预测 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13350/j.cjpb.201207

馆 藏 号：203102217...