甲基苯丙胺半抗原设计与抗体间接ELISA检测方法的优化

作     者：郑鹏 朱喆 刘翠秀 赵文嵩 曾发明 李映波 ZHENG Peng;ZHU Zhe;LIU Cuixiu;ZHAO Wensong;ZENG Faming;LI Yingbo

作者机构：中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省公安厅毒品分析及禁毒技术公安部重点实验室昆明650228 

出 版 物：《中国药物依赖性杂志》 (Chinese Journal of Drug Dependence)

年 卷 期：2021年第30卷第1期

页      码：30-34页

摘      要：目的:提供一种有效的甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)半抗原设计,并对MA抗体ELISA检测方法进行优化。方法:将合成的MA半抗原与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)分别偶联(TT/BSA-SMA)作为免疫抗原和包被抗原,通过梯度稀释法优化ELISA反应体系中抗原最佳包被浓度和最佳酶标抗体浓度(1∶2000-1∶6000)等工作条件,并进行方法的稳定性、特异性验证。结果:优化后最佳的包被缓冲液为磷酸缓冲液(phosphate buffer solution,PBS),2μg·ml-1的包被抗原在37℃2 h后4℃包被过夜为最佳包被反应条件,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉封闭120 min,最佳酶标抗体稀释度为1∶3000(1.33μg·ml-1),最佳孵育时间为60 min,最佳底物显示时间为15 min。该方法重复性实验变异系数均在5%以内,并且只能检测出MA抗体,特异性良好。结论:本研究中的半抗原结构能诱导MA抗体的产生,并成功建立间接ELISA检测MA抗体的最佳工作条件,可为MA疫苗临床前研究奠定基础。

主 题 词：甲基苯丙胺 半抗原 抗体 ELISA 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.13936/j.cnki.cjdd1992.2021.01.006

馆 藏 号：203102265...