布鲁氏菌OMP16抗体的间接ELISA方法建立

作     者：田路路 李会玲 支飞杰 王小雨 翟云逸 靳亚平 王爱华 TIAN Lu-lu;LI Hui-ling;ZHI Fei-jie;WANG Xiao-yu;ZHAI Yun-yi;JIN Ya-ping;WANG Ai-hua

作者机构：西北农林科技大学动物医学院/农业农村部动物生物技术重点实验室陕西杨凌712100 陕西省畜牧技术推广总站陕西西安710016 

基　　金：“十三五”国家重点研发计划项目(2018YFD0500904) 国家自然科学基金(31672584) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第42卷第3期

页      码：30-35页

摘      要：为建立羊血清布鲁氏菌抗体的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)方法,以布鲁氏菌(***) S2疫苗株的基因组为模板,通过引物设计、PCR扩增、原核载体构建、IPTG诱导,NTA树脂层析柱亲和层析法纯化重组布鲁氏菌外模蛋白16(OMP16),通过SDS-PAGE和Western blot鉴定分析,以纯化的OMP16作为包被抗原,优化反应条件,建立检测布鲁氏菌抗体的iELISA方法。结果显示,克隆了Omp16基因,表达、纯化了重组蛋白OMP16,该重组蛋白具有很好的反应原性。iELISA检测方法的最佳反应条件为:抗原包被浓度1μg/mL,血清稀释倍数为10倍,酶标二抗的稀释度为1:1 000,TMB的反应时间为30 min。临床样本检测显示,建立的iELISA方法具有良好的灵敏度,与虎红平板凝集试验的符合率达到了93%。本研究建立的iELISA方法能够满足生产实践中布鲁氏菌病的检测,为布鲁氏菌病流行病学调查提供了技术支持。

主 题 词：布鲁氏菌 外模蛋白16 蛋白纯化 间接酶联免疫吸附试验 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16437/j.cnki.1007-5038.2021.03.007

馆 藏 号：203102453...