猪捷申病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用

作     者：秦毅斌 苏乾莲 赵硕 卢冰霞 何颖 周展宏 袁婷婷 李斌 段群棚 欧阳康 赵武 QIN Yi-bin;SU Qian-lian;ZHAO Shuo;LU Bing-xia;HE Ying;ZHOU Zhan-hong;YUAN Ting-ting;LI Bin;DUAN Qun-peng;OUYANG Kang;ZHAO Wu

作者机构：广西兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 

基　　金：广西创新驱动发展专项资金项目(桂科AA17204057) 广西基本科研业务费专项(桂科专项20-2/19-2) 广西自然科学基金项目(2017GXNSFBA198092) 广西兽医生物技术重点实验室开放基金课题(16-380-45-B-3/17-259-36-B-2) 广西柳州市科技计划(2018BH20501) 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第56卷第11期

页      码：37-42,46页

摘      要：为建立猪捷申病毒(PTV)的TaqMan实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法,在PTV基因组序列保守区设计引物和TaqMan探针,构建重组质粒作为阳性标准品,通过优化反应条件,建立了检测PTV的RT-qPCR方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,该方法仅对PTV出现特异性扩增反应,与猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒等常见猪病毒均无交叉反应。该方法的标准曲线Ct值与4.6×10^(8)~4.6×10_(2)拷贝/μL的质粒浓度范围具有良好线性关系,标准曲线方程为Ct=-3.201×log X+40.527,线性相关系数(R^(2))为0.996,检测下限为4.6×10^(1)拷贝/μL。对不同浓度的pMD18-PTV进行组内与组间重复检测,每个浓度重复试验的Ct值的变异系数均小于4.0%,具有良好的重现性。应用所建立的方法对235份临床猪腹泻样品进行检测,PTV阳性样品32份,样品阳性率为13.62%。本试验建立的RT-qPCR方法为PTV实验室检测及病毒研究分析提供了可靠的技术手段。

主 题 词：猪捷申病毒 荧光定量RT-PCR TaqMan探针 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203102461...