绵羊BMP15基因B2突变可视化检测技术的建立

作     者：胡瑞瑞 刘莉 郭涛 李雅心 王小奎 胡圣伟 HU Ruirui;LIU Li;GUO Tao;LI Yaxin;WANG Xiaokui;HU Shengwei

作者机构：石河子大学生命科学学院石河子832000 

基　　金：国家自然科学基金项目(31660644) 新疆生产建设兵团国际科技合作计划项目(2018BC011) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第48卷第3期

页      码：810-817页

摘      要：骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因突变对绵羊排卵率、产仔数以及繁殖力有很大影响,本研究旨在建立快速可视化检测BMP15基因B2突变的技术。将改良的扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)与核酸染料SYBR GreenⅠ结合,针对BMP15基因B2突变设计ARMS特异性引物,使引物下游3′端的最后一个碱基为A,并在下游引物3′端的第3位碱基处设计额外的错配,以提高引物的特异性;经ARMS PCR扩增后,向产物中加入SYBR GreenⅠ,通过肉眼观察PCR管内的颜色变化来检测BMP15基因的B2突变。经测序发现所采集的样本均为野生型,因此,利用重叠延伸PCR构建BMP15基因B2突变型模板,测序结果显示BMP15基因B2突变型模板构建成功。ARMS PCR结果显示,ARMS特异性引物能够只扩增突变型模板,而不会扩增野生型模板,且扩增效果良好。ARMS PCR扩增后加入SYBR GreenⅠ发现已知野生型模板与阴性对照一致,呈SYBR GreenⅠ原始颜色橙黄色,而已知突变型模板呈亮绿色,且色差明显,肉眼可辨。用建立的可视化检测BMP15基因B2突变的技术检测50个小尾寒羊基因组DNA(随机向其中20个样本中加入构建的BMP15基因B2突变型模板),将可视化检测的突变型样本编号与混合样本时记录的编号对比,结果表明该技术能够准确检测绵羊BMP15基因的B2突变,且准确率高达100%。将构建的BMP15基因B2突变型的模板进行梯度稀释,对本试验可视化检测体系的灵敏度进行检测,发现ARMS可视化检测技术的灵敏度达到0.006 ng/μL。因此,本研究建立的技术能够可视化地检测绵羊BMP15基因B2突变,且准确率高,有望为高繁殖力绵羊的选育提供技术支持。

主 题 词：绵羊 BMP15基因 B2突变 可视化检测 ARMS SYBR GreenⅠ 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2021.03.004

馆 藏 号：203102594...