p38M APK基因对PM_(2.5)染毒HK-2细胞部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响

作     者：李柏茹 秦双建 李闰冰 蔡颖 郑凯 曾明 肖芳 徐新云 LI Boru;QIN Shuangjian;LI Runbing;CAI Ying;ZHENG Kai;ZENG Ming;XIAO Fang;XU Xinyun

作者机构：中南大学湘雅公共卫生学院湖南长沙410078 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518055 南华大学公共卫生学院湖南衡阳421001 

基　　金：深圳市科技研发项目(JCYJ20170413101713324 JCYJ20190807102205480) 

出 版 物：《癌变．畸变．突变》 (Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis)

年 卷 期：2021年第33卷第2期

页      码：129-135,142页

摘      要：目的:探讨p38MAPK基因对PM_(2.5)染毒人肾上皮细胞(HK-2)部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法:根据GenBank提供的p38MAPK mRNA序列,设计合成干扰序列,将重组慢病毒载体转染HK-2细胞,构建p38MAPK基因沉默细胞株。分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法检测p38MAPK mRNA和蛋白的表达水平鉴定沉默效果。用50μg/mL的PM_(2.5)混悬液分别染毒正常HK-2细胞和p38MAPK基因沉默细胞24 h,利用荧光定量PCR和Western blot检测癌基因c-myc,c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平。结果:qPCR和Western blot检测结果显示,与正常HK2细胞比较,p38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK mRNA的表达下降了58.50%,p38MAPK蛋白表达水平下降了51.33%(P<0.01)。PM_(2.5)混悬液对HK-2细胞和p38MAPK基因沉默HK-2细胞染毒后,qPCR检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_(2.5)染毒组中c-myc、c-fos、Caspase-8和Casepase-9基因表达分别升高39.89%、15.12%、19.47%和15.45%,p53和Bcl-2基因表达分别下降21.54%和31.77%,差异均具有统计学意义(P<0.05);与正常HK-2细胞PM_(2.5)染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_(2.5)染毒组中c-myc、c-fos、p53、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达分别下降了84.55%、63.55%、34.49%、37.19%和54.97%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_(2.5)染毒组中的c-myc和Caspase-8蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;与正常HK-2细胞PM_(2.5)染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_(2.5)染毒组中的c-myc、Caspase-8和Bcl-2蛋白表达减少(均为P<0.05)。结论:成功构建了p38MAPK基因沉默细胞株,PM_(2.5)可引起HK-2细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平升高,p38MAPK基因可能参与PM_(2.5)对HK-2细胞的毒性作用过程。

主 题 词：p38MAPK 大气细颗粒物 人肾上皮细胞 基因沉默 癌基因 凋亡相关基因 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100402[100402] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-616x.2021.02.008

馆 藏 号：203102688...