细胞周期蛋白依赖性激酶4重组蛋白兔血清抗体的制备及鉴定

作     者：慈兴元 王艾俐 叶一鸣 徐思诗 王佳贝 潘依琦 陈俊 张丽芳 赵孔南 CI Xing-yuan;WANG Ai-li;YE Yi-ming;XU Si-shi;WANG Jia-bei;PAN Yi-qi;CHEN Jun;ZHANG Li-fang;ZHAO Kong-nan

作者机构：温州医科大学分子病毒与免疫学研究所浙江温州325035 

基　　金：浙江省科技厅公益项目(LGF18H160030) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2021年第34卷第4期

页      码：406-409,414页

摘      要：目的制备细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)重组蛋白兔血清抗体并鉴定其特性。方法将设计合成的CDK4基因克隆至载体pET21a(+)中,构建重组质粒pET21a(+)/CDK4,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经镍螯合亲和层析纯化,将纯化的重组蛋白CDK4与等量弗式佐剂混合,经背部皮下多点免疫日本大耳白兔,隔周1次,共免疫3次。于末次免疫后0(当天)、2、4、6、8周采血,分离血清。间接ELISA法检测效价,免疫荧光及免疫组化法检测特异性。结果经酶切及测序鉴定,重组质粒pET21a(+)/CDK4构建正确。重组蛋白CDK4相对分子质量约为19 100。第8周CDK4兔血清抗体效价达1∶163 840,能特异性识别宫颈癌Siha细胞及宫颈癌组织中表达的CDK4蛋白。结论成功制备了高效价、特异性强的CDK4兔血清抗体,为进一步研究CDK4生物学特性奠定了基础。

主 题 词：细胞周期蛋白依赖性激酶4 重组蛋白 原核细胞 基因表达 血清抗体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.003309

馆 藏 号：203102834...