屋尘螨第13组变应原克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

作     者：官秀丽 袁如意 黄妙琴 杨礼腾 刘志刚 刘晓宇 GUAN Xiu-li;YUAN Ru-yi;HUANG Miao-qin;YANG Li-teng;LIU Zhi-gang;LIU Xiao-yu

作者机构：深圳大学过敏反应与免疫学研究所广东深圳518060 深圳大学第三附属医院变态反应科广东深圳518060 

基　　金：国家自然科学基金(No.31729002,No.U1801286,No.81971514) 广州市科学研究计划重点项目(No.201804020043) 深圳市孔雀计划团队项目(No.KQTD20170331145453160) 深圳市科技计划国际科技合作项目(No.GJHZ2018041819053) 南山区“领航团队”支持计划项目(No.LHTD20180007) 呼吸疾病国家重点实验室开放课题(No.SKLRD-OP-201909) 

出 版 物：《中国热带医学》 (China Tropical Medicine)

年 卷 期：2021年第21卷第4期

页      码：303-307页

摘      要：目的克隆表达及纯化屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus,Der p)第13组变应原(Der p13)蛋白,并鉴定其免疫原性。方法提取屋尘螨总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术获得Der p13的cDNA片段。正确设计引物,利用已获得的cDNA片段进行PCR扩增,获得Der p13基因片段。将扩增产物连接到载体上并转入克隆菌Top10中,挑选阳性菌落,保菌取样送到上海生工生物有限公司进行测序。将测序正确的基因转入表达载体PET-24a中,经Bam H I、Xho I双酶切后用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达和镍柱亲和层析法纯化重组蛋白Der p13。使用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)以及免疫印迹(Western Blot)鉴定纯化产物。结果成功构建表达了质粒PET-24a-Der p13,SDS-PAGE电泳结果显示上清可溶性蛋白表达量较多,分子质量约为13000。免疫印迹结果表明该蛋白可与尘螨过敏患者血清结合,具有一定免疫原性,重组蛋白Der p13三级结构预测表明其主要是β折叠,根据DNAStar抗原指数、亲水性、表面可及性、柔韧性等数据可以推导出蛋白Der p13抗原区,重组蛋白Der p13进化树分析结果显示屋尘螨与粉尘螨、疥、害嗜鳞螨及储存螨同源性较高。结论成功克隆表达、纯化出Der p13重组蛋白,该蛋白具有一定的免疫原性,为临床实验研究过敏性疾病的诊断与治疗奠定基础。

主 题 词：屋尘螨 第13组变应原 表达纯化 免疫原性 三级结构 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13604/j.cnki.46-1064/r.2021.04.01

馆 藏 号：203103128...