CRISPR/Cas9介导TLR5敲除猪肺泡巨噬细胞系建立及对革兰阴性菌黏附能力的影响

作     者：许超 郜重丞 毕祯彬 吴圣龙 包文斌 XU Chao;GAO Zhongcheng;BI Zhenbin;WU Shenglong;BAO Wenbin

作者机构：扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏现代农业(生猪)产业技术体系良种繁育创新团队江苏扬州225009 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31772560) 江苏省重点研发计划(现代农业)项目(BE2019344、BE2019341) 江苏高校优势学科建设工程项目(PAPD) 

出 版 物：《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 (Journal of Yangzhou University：Agricultural and Life Science Edition)

年 卷 期：2021年第42卷第2期

页      码：32-39页

摘      要：Toll样受体5 (TLR5)是Toll-like受体家族中的重要成员,在革兰阴性菌引起的炎症反应中发挥着重要的调控作用。通过CRISPR/Cas9基因敲除技术对猪肺泡巨噬细胞(PAMS)的TLR5基因进行敲除,然后经菌落计数,检测TLR5基因敲除后对大肠埃希菌F18ab和F18ac以及沙门菌黏附能力的影响。结果表明:设计的2条sgRNAs成功插入CRISPR/Cas9载体中,序列正确,转染猪肺泡巨噬细胞后均能稳定表达,且PCR测序峰图出现套峰,表明敲除载体具有切割活性。利用有限稀释法,最终获得1株缺失15个碱基的单克隆细胞系TLR5-sg1。对TLR5敲除细胞进行qPCR和Western blot验证,结果显示TLR5基因的转录水平极显著下调,其蛋白质水平也明显降低。细菌黏附试验结果显示,TLR5敲除细胞中黏附的大肠埃希菌F18ab、F18ac和沙门菌(ATCC13312)的数量均极显著低于对照组。这一研究成功建立了猪TLR5基因敲除的3D4/21细胞系,且TLR5基因的敲除会降低大肠埃希菌和沙门菌对3D4/21细胞的黏附能力,为进一步探究TLR5基因的生物学功能建立了细胞模型,为深入探讨TLR5基因在炎症反应中的免疫调控作用提供了试验素材。

主 题 词：猪 TLR5基因 CRISPR/Cas9 细菌黏附 革兰阴性菌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 0905[农学-林学类] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090501[090501] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16872/j.cnki.1671-4652.2021.02.005

馆 藏 号：203103129...