猪O型口蹄疫病毒抗原表位/VP1蛋白的融合表达及免疫原性研究

作     者：刘家勐 宋丹 罗朝唯 吴珂珂 易琳 赵明秋 陈金顶 丁红星 LIU Jiameng;SONG Dan;LUO Chaowei;WU Keke;YI Lin;ZHAO Mingqiu;CHEN Jinding;DING Hongxing

作者机构：华南农业大学兽医学院广东广州510642 

基　　金：国家重点研发计划(2017YFD0500600,2017YFD0501104) 广州市科技计划(201803020005) 广东省普通高校重点研究项目(2019KZDXM026) 

出 版 物：《华南农业大学学报》 (Journal of South China Agricultural University)

年 卷 期：2021年第42卷第3期

页      码：1-8页

摘      要：【目的】获得可稳定表达猪O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)抗原表位融合结构蛋白VP1的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO-K1),制备亚单位疫苗。【方法】设计合成含FMDV抗原表位与VP1基因序列的重组基因RP1,将其克隆到表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro中,将构建的重组质粒与辅助质粒PLP1、PLP2和PLP3共转染HEK-293T细胞,获得重组慢病毒HIV-RP1;将收获的病毒液感染CHO-K1细胞,经筛选获得单克隆细胞株,通过间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot鉴定,获得可表达RP1的阳性细胞株,命名为CHO-K1-RP1;将CHO-K1-RP1连续传30代,每隔5代收获相同数量的细胞样品进行Western blot鉴定。【结果】IFA结果显示,表达RP1的细胞发出绿色荧光,而空白对照无绿色荧光;Western blot结果显示,在约55 kU处能观察到清晰的条带;表明成功获得了融合蛋白。将获得的融合蛋白与佐剂等体积混合制备成亚单位疫苗免疫BALB/c雌鼠,抗体检测结果显示,二次免疫后,该亚单位疫苗组与口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)商品化灭活疫苗组小鼠之间抗体水平无显著差异,两者抗体水平均显著高于对照组(P<0.05)。【结论】本研究构建的亚单位疫苗能有效刺激小鼠机体产生免疫应答反应,为猪口蹄疫新型疫苗的研制提供了参考。

主 题 词：猪 口蹄疫病毒 VP1 CHO-K1 亚单位疫苗 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.7671/j.issn.1001-411X.202009034

馆 藏 号：203103131...