蓝舌病病毒、流行性出血病病毒和帕利亚姆血清群病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及应用

作     者：杨振兴 李占鸿 肖雷 谢佳芮 廖德芳 李卓然 李华春 朱建波 杨恒 YANG Zhenxing;LI Zhanhong;XIAO Lei;XIE Jiarui;LIAO Defang;LI Zhuoran;LI Huachun;ZHU Jianbo;YANG Heng

作者机构：云南省畜牧兽医科学院/云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224 

基　　金：国家自然科学基金(31760744) 国家重点研发计划(2016YFD0500908,2017YFC1200505) 云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目(2017HB055) 

出 版 物：《华南农业大学学报》 (Journal of South China Agricultural University)

年 卷 期：2021年第42卷第3期

页      码：17-25页

摘      要：【目的】建立蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)、流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)及帕利亚姆血清群病毒(Palyam serogroup virus,PALV)快速筛查和诊断的三重RT-qPCR检测技术。【方法】选择BTV的NS3、EHDV的NS1以及PALV的VP7基因作为靶基因,设计3组特异性引物和探针,建立3种病毒的三重RT-qPCR检测方法。对检测方法的灵敏度、特异性和重复性进行验证,同时使用我国分离的BTV、EHDV与PALV不同血清型毒株和对应的阳性血液样本,与24个BTV血清型及6个EHDV血清型参考毒株对该三重法的检测效果进行验证。【结果】三重RT-qPCR的扩增效率均可达90%以上,对3种病毒核酸拷贝数的检测下限均为10μL-1级别,与单重法的检测灵敏度相当;与阿卡斑病毒、小反刍兽疫病毒、口蹄疫病毒和牛流行热病毒之间无交叉反应;Ct值批内、批间变异系数均在2%以内;可检测出24种BTV血清型、6种EHDV血清型与3种PALV血清型,具有群特异性;可有效检测血液中的病毒核酸,检测结果与单重法一致。【结论】本研究建立的BTV、EHDV与PALV三重RT-qPCR具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样本中对3种病毒的同时诊断与筛查。

主 题 词：三重RT-qPCR 蓝舌病病毒 流行性出血病病毒 帕利亚姆血清群病毒 病毒检测 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.7671/j.issn.1001-411X.202007033

馆 藏 号：203103133...