一种用于检测1型糖尿病的抗原蛋白质表达及鉴定方法的临床应用

作     者：袁晓燕 宋宇 曲业敏 李武 袁锦云 丛海燕 鞠毅 姚继承 王明义 Yuan Xiaoyan;Song Yu;Qu Yemin;Li Wu;Yuan Jinyun;Cong Haiyan;Ju Yi;Yao Jicheng;Wang Mingyi

作者机构：威海市立医院检验科山东威海264200 威海市立医院中心实验室山东威海264200 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司试剂生产部广东深圳518122 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司试剂研发部广东深圳518122 威海威高生物科技有限公司研发部山东威海264200 

基　　金：国家科技重大专项(2009ZX10004-719 2013ZX10004217) 

出 版 物：《实用检验医师杂志》 (Chinese Journal of Clinical Pathologist)

年 卷 期：2021年第13卷第1期

页      码：46-48页

摘      要：目的表达并鉴定一种用于检测1型糖尿病的抗原蛋白质,探讨其在化学发光检测系统中的临床应用。方法利用Primer 5.0软件设计引物,扩增谷氨酸脱羧酶65(GAD65)的部分蛋白质编码区(CDS)并克隆至pFastBac1载体中,经测序验证后在SF9细胞中表达。采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定所得蛋白。利用该蛋白制备一种用于1型糖尿病检测的试剂盒,将其运用于化学发光检测系统,计算阳性检出率,并比较化学发光检测系统与蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)阳性检出率的差异。结果成功表达了与GAD65抗体特异结合的抗原蛋白质,SDS-PAGE显示其相对分子质量为65000,与预测值相符;亲和层析纯化后蛋白纯度≥95%。所制备的化学发光检测试剂盒的阳性检出率明显高于Western blotting〔78.95%(30/38)比52.63%(20/38),P<0.05〕。结论GAD65抗体特异结合抗原蛋白纯度高、特异性强,利用该蛋白制备的相应试剂盒可应用于化学发光检测系统,提高了GAD65抗体的阳性检出率和对1型糖尿病的诊断效率,避免传统检测方法的漏检,值得在临床推广。

主 题 词：1型糖尿病 谷氨酸脱羧酶65 化学发光检测系统 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-7151.2021.01.015

馆 藏 号：203103177...