粉尘螨过敏原Der f 35的克隆表达及免疫学鉴定

作     者：陈扬 陈献雄 欧阳春艳 钟永浩 刘晓宇 CHEN Yang;CHEN Xianxiong;OUYANG Chunyan;ZHONG Yonghao;LIU Xiaoyu

作者机构：深圳大学过敏反应与免疫学研究所深圳大学医学部广东深圳518060 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31729002,U1801286,81971514) 广州市科学研究计划重点资助项目(201804020043) 深圳市孔雀计划团队资助项目(KQTD20170331145453160) 深圳市科技计划国际科技合作资助项目(GJHZ2018041819053) 南山区“领航团队”支持计划资助项目(LHTD20180007) 呼吸疾病国家重点实验室开放课题资助项目(SKLRD-OP-201909) 

出 版 物：《深圳大学学报（理工版）》 (Journal of Shenzhen University(Science and Engineering))

年 卷 期：2021年第38卷第3期

页      码：301-306页

摘      要：粉尘螨是诱导过敏性疾病的重要变应原,可诱发Ⅰ型变态反应,对其免疫原性的鉴定是研究过敏性鼻炎等过敏性疾病的基础.首次对粉尘螨过敏原基因Der f 35进行克隆表达、纯化及免疫原性鉴定,提取粉尘螨总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),根据已知基因序列(GenBank:LC175222.1)设计引物进行反转录聚合酶链式反应扩增,经Bam H I和Xho I双酶切,连接构建pET-32a-Der f 35载体,并克隆至大肠杆菌TOP 10菌株,取1 mL克隆菌液进行测序.使用试剂盒提取高纯度质粒转至感受态细胞Rosetta(DE3)中进行诱导、表达纯化及免疫学鉴定,并进行同源性比对分析、进化树构建及二级结构预测.克隆和表达结果显示,Der f 35基因的片段长约436个碱基对(base pair,bp);重组蛋白Der f 35相对分子质量约为30 ku(1 u=1 D),与预期结果相符.蛋白质印迹法结果证明,Der f 35与尘螨过敏性疾病患者的血清结合有明显的反应原性.生物信息学进化树结果显示,粉尘螨与屋尘螨、热带无爪螨、害嗜鳞螨、绵羊痒螨和免耳痒螨亲缘关系较近,二级结构预测显示Der f 35的氨基酸序列由2个α螺旋、6个β折叠、2个β转角和10个无规则卷曲片段组成.研究结果可为尘螨过敏性疾病的诊断与治疗提供理论依据.

主 题 词：生物信息学 免疫学 粉尘螨 过敏原Der f 35 克隆表达 过敏原性鉴定 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3724/SP.J.1249.2021.03301

馆 藏 号：203103250...