一组靶向HIV膜蛋白的单克隆抗体的分离和功能鉴定

作     者：胡园园 亢佳星 郝彦玲 任莉 王硕 洪坤学 邵一鸣 王铮 李丹 Hu Yuanyuan;Kang Jiaxing;Hao Yanling;Ren Li;Wang Shuo;Hong Kunxue;Shao Yiming;Wang Zheng;Li Dan

作者机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室北京102206 

基　　金：国家自然科学基金(81872680) 传染病预防控制国家重点实验室优青课题(2019SKLID402) 国家"十三五"重大传染病防治专项(2018ZX10731-101-001-008,2018ZX10734-404) 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2021年第35卷第2期

页      码：140-146页

摘      要：目的从中国人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type I, HIV-1)慢性感染者体内筛选针对膜蛋白的单克隆抗体并对其进行功能鉴定。方法采用单细胞特异性分选的方法从HIV-1感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中筛选抗原特异性单个B细胞,通过逆转录和巢式PCR获得抗体重链和轻链的可变区基因。利用免疫遗传学数据库(immunogenetics database, IMGT)分析抗体基因家系及突变率。抗体表达纯化后,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定其结合活性和识别表位,通过假病毒中和实验检测抗体中和能力。结果从1例慢性HIV-1感染者样本中筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性抗体。抗体重链可变区基因来自IGHV1-69*09、IGHV1-08*01、IGHV1-46*01、IGHV4-34*01、IGHV4-61*01和IGHV3-43*02家系,突变率为10.76%~21.05%。轻链可变区基因来自IGKV3-20*01、IGKV1-39*01、IGKV1-NL1*01、IGKV3-15*01和IGKV1-9*01家系,突变率为6.03%~18.64%。7个抗体均可以结合gp140,其中抗体508-B1、508-C1、508-C5、508-D4和508-E5主要识别gp41区;508-D6和508-F1结合gp120区。508-D4和508-F1分别可以中和Global Panel假病毒盘中的CNE8(Tier 2)和X2278(Tier 2),IC50值分别为38.1 μg/ml和41.7 μg/ml。结论本研究成功筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性的单克隆抗体,其中5个为识别gp41区的单克隆抗体,2个为gp120结合抗体。2个抗体具备有限的中和能力。该组抗体可为HIV-1检测试剂和抗体药物研发以及艾滋病疫苗免疫原设计提供技术储备。

主 题 词：HIV-1 中和活性 表位 单克隆抗体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.cn112866-20210114-00010

馆 藏 号：203103261...