针对Mcl-1的shRNA重组质粒体外增强肝癌细胞对化疗敏感性的实验研究

作     者：余琴 刘曌宇 陈琼 常莹 林菊生 Yu Qin;Liu Zhaoyu;Chen Qiong;Chang Ying;Lin Jusheng

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科武汉430030 

基　　金：湖北省自然科学基金资助(2014CFB437) 

出 版 物：《中国组织化学与细胞化学杂志》 (Chinese Journal of Histochemistry and Cytochemistry)

年 卷 期：2015年第23卷第3A期

页      码：236-240页

摘      要：目的构建针对髓细胞白血病基因-1(Mcl-1)的shRNA的重组质粒,探讨该重组质粒对肝癌细胞化疗敏感性的影响。方法设计3对针对Mcl-1基因不同位点的shRNA片段的真核表达载体psiRNA-hH1neo-Mcl,用阳离子脂质体法将重组质粒转染至人肝癌细胞株HepG2中,采用RT-PCR和Western blot方法检测转染后Mcl-1mRNA及蛋白表达情况,筛选Mcl-1基因表达沉默效应最好的重组质粒。用MTT和流式细胞仪分别检测单独使用丝裂霉素(Mitomycin,MMC)、单独使用重组质粒以及联合使用重组质粒与MMC对HepG2细胞的增殖和凋亡的影响。结果成功构建含不同shRNA片段的重组质粒,依次命名为pMclsi-1、pMclsi-2、pMclsi-3。经测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致。重组质粒转染HepG2细胞后,Mcl-1基因的mRNA水平及蛋白水平明显下调,其中以pMclsi-1下调效应最强。MTT检测显示,pMclsi-1联合化疗药物MMC对HepG2细胞增殖的抑制活性显著高于单用MMC组或单用pMclsi-1组,流式细胞仪检测显示,pMclsi-1联合化疗药物MMC促进HepG2细胞凋亡的活性显著高于单用MMC组或pMclsi-1组。结论针对Mcl-1基因的siRNA可特异阻断Mcl-1基因的表达,从而明显增强肝癌细胞对化疗药物MMC的敏感性。

主 题 词：Mcl-1 shRNA 丝裂霉素 肝癌细胞 化疗敏感性 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3870/zgzzhx.2015.03.007

馆 藏 号：203103279...