大鼠shRNA-Slfn5重组腺病毒载体的构建及其在EPCs中的转染效率

作     者：李玉珠 况春燕 LI Yuzhu;KUANG Chunyan

作者机构：贵州大学医学院贵阳550025 贵州省人民医院心内科贵阳550002 

基　　金：国家自然科学基金项目(81560056) 贵州省第十二批优秀青年科技人才项目(黔科合平台人才5662) 贵州省科技计划项目(黔科合基础1097) 贵州省留学人员科技活动择优资助项目(黔人项目资助合同003号) 贵州省科技平台及人才团队计划项目(黔科合平台人才2017-5405) 

出 版 物：《重庆医学》 (Chongqing medicine)

年 卷 期：2021年第50卷第8期

页      码：1277-1283页

摘      要：目的构建大鼠shRNA-Slfn5重组腺病毒载体并观察在内皮祖细胞(EPCs)中的转染效率。方法根据Rat Slfn5基因的mRNA序列设计合成siRNA片段5个,分别克隆到pDKD-CMV-U6-shRNA上转入大肠杆菌感受态细胞,PCR筛选转化子,阳性克隆进行测序;利用Admax系统选取目的穿梭质粒shRNA-Slfn5(5)包装和扩增重组腺病毒shRNA-Slfn5及病毒滴度测定;利用Slfn5过表达腺病毒质粒中目的基因携带Flag标签,通过Western blot法检测Slfn5过表达腺病毒质粒与靶点质粒共转染293T细胞中Flag表达,观察靶点质粒对Slfn5表达的影响;最后用病毒感染EPCs并用绿色荧光蛋白量检测转染效率。结果经测序验证5组目的质粒构建成功;重组腺病毒质粒shRNA-Slfn5(1)、shRNA-Slfn5(4)、shRNA-Slfn5(5)可明显抑制Flag蛋白的表达;shRNA-Slfn5病毒滴度为3.95×10^(10)PFU/mL;EPCs的转染效率为(85.64±2.58)%。结论构建了shRNA-Slfn5重组腺病毒载体,其在EPCs转染效率高。

主 题 词：Schlafen5 内皮祖细胞 shRNA 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-8348.2021.08.004

馆 藏 号：203103295...