基于非洲猪瘟病毒CD2v基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：韩玉 王涛 潘力 孙茂文 周萍萍 王冰 王翌 罗玉子 仇华吉 孙元 HAN Yu;WANG Tao;PAN Li;SUN Maowen;ZHOU Pingping;WANG Bing;WANG Yi;LUO Yuzi;QIU Huaji;SUN Yuan

作者机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 

基　　金：国家重点研发计划基金资助项目(2017YFD0500601) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2021年第41卷第5期

页      码：847-852页

摘      要：为用于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)CD2v基因功能研究及区分ASFV野毒株和CD2v基因缺失毒株,本研究根据ASFV中国流行株(MK333180.1)的CD2v基因序列设计了1对特异性引物和探针,经过条件优化建立了一种以ASFV CD2v基因为靶标的能够鉴别ASFV野毒株和CD2v基因缺失毒株的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法在质粒标准品为1.6×101~1.6×10^(8)拷贝/μL时,线性关系良好,线性相关系数R^(2)为0.998;该方法可以特异性检测ASFV,不与猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒1型和猪圆环病毒2型发生交叉反应;最低检测限为16拷贝/μL,比常规PCR的敏感性高出3个数量级;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%;能够有效地区分ASFV野毒株和CD2v基因缺失毒株;该方法与本实验室建立的针对ASFV p72基因的荧光定量PCR方法在检测临床样品时无统计学差异且符合率高。本研究所建立的TaqMan荧光定量PCR方法为ASFV的快速检测提供了新靶标,同时也为ASFV CD2v基因功能的研究、野毒株与CD2v基因缺失毒株的鉴别提供了有力的技术支持。

主 题 词：非洲猪瘟病毒 CD2v基因 荧光定量PCR 鉴别诊断 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.05.02

馆 藏 号：203103390...