犬瘟热病毒(CDV) RPA-SYBR Green Ⅰ 检测方法的建立与应用

作     者：郝镯 张珊珊 李楠 田多 李吉平 孟轲音 万忠海 穆玉堂 李忠义 王承宇 HAO Zhuo;ZHANG Shanshan;LI Nan;TIAN Duo;LI Jiping;MENG Keyin;WAN Zhonghai;MU Yutang;LI Zhongyi;WANG Chengyu

作者机构：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122 

基　　金：国家重点研发计划资助项目(2016YFD0501001) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2021年第41卷第5期

页      码：905-910页

摘      要：为建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断犬瘟热病毒(CDV)的方法,将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)与SYBR GreenⅠ相结合,根据CDV N基因序列中同源性相对较高的保守区设计1套标有生物素Biotin的特异性引物和1条标记dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,优化反应条件和体系,分析其灵敏性及特异性,最后建立一种可以进行临床应用的,特异性检测CDV的RPA-SYBR GreenⅠ方法。结果显示,成功构建检测CDV的RPA-SYBR GreenⅠ方法,此方法的最佳反应条件为实验人员闭合手掌中孵育10 min,引物与探针的最佳比例为2∶1。该方法的最低检测下限为1×10^(1)~1×10^(0) TCID_(50)/mL,能够特异地检测出CDV。应用本方法检测临床样品的结果与ELISA、RT-PCR方法的结果一致。结果表明,本试验所建立的CDV RPA-SYBR GreenⅠ检测方法特异性强,灵敏度高,操作简单,可应用于临床。

主 题 词：CDV RPA SYBR GreenⅠ N基因 重组酶聚合酶扩增 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.05.12

馆 藏 号：203103395...