来源于Bacillus ***9 D-海因酶半理性设计的研究

作     者：樊帅 刘坤 金媛媛 杨兆勇 FAN Shuai;LIU Kun;JIN Yuanyuan;YANG Zhaoyong

作者机构：中国医学科学院医药生物技术研究所北京100050 

基　　金：国家自然科学基金项目(81761128016 8187131584) 

出 版 物：《生物技术进展》 (Current Biotechnology)

年 卷 期：2021年第11卷第3期

页      码：386-392页

摘      要：D-对羟基苯甘氨酸是一种重要的精细化工品,在制药行业具有广泛的应用前景。酶法是生产D-对羟基苯甘氨酸的主要手段,但由于缺乏高催化效率的酶而限制了D-对羟基苯甘氨酸的生产。为了提高来自Bacillus ***9的D-海因酶(HYD)的催化效率,进而提高D-对羟基苯甘氨酸的产量,对HYD的底物结合通道进行分析,选取底物通道瓶颈处的氨基酸进行饱和突变和筛选,以提高HYD的催化效率。结果显示,突变体F159S、F159A和F65V的活性相较于野生型HYD分别提高了51%、40%和17%,通过对突变体F65V、F159S和双位点突变F65V/F159S的酶动力学研究发现,突变体的K_(m)值基本与野生型HYD相似,而k_(cat)是野生型HYD的1.3、1.9和2.0倍,最终双位点突变F65V/F159S的催化效率k _(cat)/K_(m)是野生型HYD的2.4倍。高催化效率突变体的获得,以及对突变体动力学的分析,对酶法制备D-对羟基苯甘氨酸具有重要的研究意义和应用价值。

主 题 词：D-海因酶 半理性设计 饱和突变 酶动力学 

学科分类：08[工学] 082203[082203] 0822[工学-核工程类] 

D　O　I：10.19586/j.2095-2341.2021.0049

馆 藏 号：203103403...