nicastrin基因沉默的斑马鱼模型构建及其色素异常机制的初步研究

作     者：李文锐 贾苇雪 张蕴斌 林麟 李诚让 Li Wenrui;Jia Weixue;Zhang Yunbin;Lin Lin;Li Chengrang

作者机构：中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病医院皮肤科江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 中国科学院生物化学与细胞生物学研究所上海200031 

基　　金：国家自然科学基金(81472872) 中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2016-I2M-1-002) 

出 版 物：《中华皮肤科杂志》 (Chinese Journal of Dermatology)

年 卷 期：2021年第54卷第5期

页      码：402-407页

摘      要：目的探讨nicastrin(nct)基因对斑马鱼黑素细胞生物学功能的影响。方法利用吗啉代寡核苷酸(MO)技术针对斑马鱼nct基因mRNA设计nct-MO序列,同时设计对照MO序列(ctrl-MO),并构建5′端为MO靶序列的增强绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA,通过显微注射的方式将nct-MO或ctrl-MO与EGFP mRNA共注射入斑马鱼胚胎中,验证nct-MO的沉默效率,观察其表型变化。以野生型斑马鱼作为空白对照组,实时荧光定量PCR检测黑素合成notch信号通路相关基因mitfa、tyr、tyrp1a、tyrp1b、dct、pmela、notch1a、notch1b、hey1 mRNA表达水平的变化。多组间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果斑马鱼受精后8 h,ctrl-MO+EGFP mRNA组斑马鱼胚胎中均有绿色荧光表达,而nct-MO+EGFP mRNA组及空白对照组胚胎均未见绿色荧光。受精后48 h,nct-MO组幼鱼尾部色素沉着区面积占比(0.169±0.083)低于ctrl-MO组(0.258±0.042,t=3.202,P=0.005),且nct-MO组色素分布紊乱。实时荧光定量PCR显示,nct-MO组、ctrl-MO组、空白对照组间pmela、tyrp1a、hey1基因mRNA相对表达量差异有统计学意义(均P0.05);nct-MO组pmela、tyrp1a相对表达水平(0.708±0.028、0.558±0.136)低于ctrl-MO组(1.023±0.142、1.016±0.134,均P<0.05)。结论nct基因可能通过调控斑马鱼黑素合成影响黑素细胞生物学功能。

主 题 词：色素沉着异常 化脓性汗腺炎 Nicastrin基因 γ分泌酶 斑马鱼模型 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100206[100206] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.35541/cjd.20200617

馆 藏 号：203103409...