TaqMan-rRT-PCR检测猪霍乱沙门菌方法的建立和实验室评价

作     者：张景山 李旭 闫梅英 阚飙 樊粉霞 ZHANG Jing-shan;LI Xu;YAN Mei-ying;KAN Biao;FAN Fen-xia

作者机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 北京工商大学轻工科学技术学院北京100048 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目(No.81501724) 十三五传染病重大专项(No.2018ZX10101002)联合资助 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2021年第37卷第5期

页      码：410-415页

摘      要：目的基于猪霍乱沙门菌血清型特异性基因,建立TaqMan逆转录实时聚合酶链反应(TaqMan-rRT-PCR)检测猪霍乱沙门菌的方法。方法利用基因组序列比对筛选到猪霍乱沙门菌特有的基因SC0358,通过普通PCR及利用多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株共计145株,评价该方法的菌株特异性,针对该基因设计TaqMan-rRT-PCR检测方法的引物,优化反应条件,建立针对该靶基因的TaqMan-rRT-PCR检测方法,以纯菌及血液模拟标本RNA为模板进行敏感性检测。结果利用该方法检测26株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株扩增均阴性,对纯菌RNA检测中,TaqMan-rRT-PCR的最低检测限度为5 fg/反应,约为10个拷贝/反应。对全血液模拟样品分析中,敏感性达25 cfu/mL。结论以猪霍乱沙门菌保守、特异基因SC0358建立的TaqMan-rRT-PCR方法,能够简便快捷区分猪霍乱沙门菌与其他血清型沙门菌,尤其能够区分与其有抗原式相同的丙型副伤寒沙门菌,此方法为猪霍乱沙门菌感染的快速诊断提供了简便的手段,可用于对猪霍乱沙门菌的早期诊断。

主 题 词：猪霍乱沙门菌 TaqMan 检测 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.063

馆 藏 号：203103448...