HBsAg、HSV-2gD双抗原真核表达载体的构建

作     者：郑绮菡 王玉 焦凤萍 于爱莲 于广福 

作者机构：泰山医学院病原学教研室山东泰安271000 

基　　金：山东省自然科学基金项目(No.ZR2009CQ003) 山东省卫生厅资助课题(No.2007HZ037 No.2011QW029) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2012年第7卷第6期

页      码：401-405页

摘      要：目的利用简并引物PCR法及重叠PCR法构建HBsAg(S),HSV-2gD模拟抗原表位P6及天然抗原表位NP6,IL-18真核表达载体,并对其表达能力进行鉴定,为后期疫苗的研制奠定基础。方法采用简并引物PCR法扩增IL-18-P6(包括P6-IL-18)片段及IL-18-NP6(包括NP6-IL-18);根据GenBank(FJ589066.1)公布的S基因设计引物,扩增获得含有重叠区的S片段(包括S1,S2,S3,S4);采用重叠PCR法扩增三基因融合片段IL-18-P6-S,IL-18-NP6-S,S-P6-IL-18和S-NP6-IL-18,经纯化回收后将其克隆到原核载体pMD 18-T simple vector中,测序正确的目的片段插入真核表达载体pcDNA3.1(-),构建重组质粒pcDNA3.1-IL-18-P6-S,pcDNA3.1-IL-18-NP6-S,pcDNA3.1-S-P6-IL-18和pcD-NA3.1-S-NP6-IL-18,采用间接免疫荧光法检测靶基因的表达情况。结果成功构建了含有双抗原的真核表达载体pcDNA3.1-IL-18-P6-S,pcDNA3.1-IL-18-NP6-S,pcDNA3.1-S-P6-IL-18和pcDNA3.1-S-NP6-IL-18。脂质体介导真核表达载体转染CHO细胞,间接免疫荧光法检测细胞浆中有黄绿色荧光。结论构建的真核表达载体pcDNA3.1-IL-18-P6-S,pcDNA3.1-IL-18-NP6-S,pcDNA3.1-S-P6-IL-18和pcDNA3.1-S-NP6-IL-18能在CHO细胞中有效表达。

主 题 词：重叠PCR HBsAg HSV-2 gD IL-18 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.2012.06.010

馆 藏 号：203103514...