禽流感群特异性间接原位RT-PCR检测方法

作     者：杨素 陈博文 秦爱建 廖明 薄清如 廖秀云 沙才华 王娟 任涛 曹伟胜 YANG Su;CHEN Bo-wen;QIN Ai-jian;LIAO Ming;BO Qing-ru;LIAO Xiu-yun;SHA Cai-hua;WANG Juan;REN Tao;CAO Wei-sheng

作者机构：扬州大学兽医学院江苏扬州225009 珠海出入境检验检疫局广东珠海519015 华南农业大学广东广州510642 山西农业大学山西太谷030801 

基　　金：广东省农业攻关项目(2007B020803004) 珠海市科技计划资助项目(PC20071055) 广东省农产品安全生产关键技术研究与示范重点专项(2009A020101006) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2009年第29卷第12期

页      码：1534-1538,1556页

摘      要：从GenBank下载禽流感病毒(Auian in fluenza virus,AIV)NP基因序列,通过比对选取NP基因中较为保守的片段,设计1对引物,通过RT-PCR方法扩增270 bp的目的片段,经测序确认目的片段序列正确后,用地高辛标记扩增产物制备探针。在BSL-3实验室,用AIV人工感染鸡胚成纤维细胞和SPF鸡后,制作细胞涂片和组织石蜡切片,然后在经前处理后的细胞涂片和石蜡切片上进行原位RT-PCR,再与地高辛标记的探针进行原位杂交,对细胞和组织中的AIV进行检测和定位。研究结果表明,本方法能检测出约1μg/L质粒的DNA,并能特异性地在细胞涂片和石蜡组织切片中检测和定位AIV,且成纤维细胞感染病毒8 h后即可检测到阳性信号,具有良好的特异性和较高的敏感性,为动物组织中AIV的检测定位和致病机理研究提供了敏感、特异和更为直观的方法。

主 题 词：禽流感 群特异性 细胞涂片 石蜡切片 间接原位RT—PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2009.12.026

馆 藏 号：203103526...