细菌外膜蛋白A通用抗原表位预测及其抗体磁珠捕获病原菌效果的初步评价

作     者：王磊 柯跃华 栗业 李怡璇 杨瑞馥 高波 韩延平 WANG Lei;KE Yue-hua;LI Ye;LI Yi-xuan;YANG Rui-fu;GAO Bo;HAN Yan-ping

作者机构：军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军32277部队新骝哈密839108 解放军疾病预防控制中心北京100071 

基　　金：全军后勤科研计划重点项目(BWS18J012 BWS17J030) 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2021年第45卷第5期

页      码：336-339,353页

摘      要：目的利用革兰阴性细菌外膜蛋白A高度保守的特性,设计和制备可识别多种食源性革兰阴性细菌的免疫磁珠,并对该免疫磁珠的识别和富集效果进行评价。方法利用革兰阴性外膜蛋白A序列高度保守的特性,从国际生物基因数据库(NCBI)提取该蛋白的氨基酸序列进行同源比对;使用抗原表位预测工具"BepiPred"预测具有免疫原性的抗原表位;将预测的多肽序列分两组混合免疫大耳白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法对抗体进行评价,挑选出优质抗体偶联磁珠捕捉细菌,利用平板培养计数的方法检验抗体的有效性和广谱性。结果经间接ELISA筛选,制备的多抗可识别阪岐克洛诺杆菌、肠出血性大肠埃希菌O157∶H7、弗氏志贺菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、小肠结肠炎耶尔森菌6种常见食源性致病菌,识别灵敏度为25μg/ml;使用该抗体制备的500 nm羧基免疫磁珠对6种细菌的捕捉率为0.47%~2.03%。结论与传统的免疫磁珠相比较,该项目制备的多抗免疫磁珠具有广谱性的特点,可提高检验效率,是一种具有应用前景的检测思路。

主 题 词：革兰阴性细菌 外膜蛋白A 免疫磁珠 食源性致病菌 快速检测 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.7644/j.issn.1674-9960.2021.05.003

馆 藏 号：203103576...