非洲猪瘟多基因家族MGF-505-3R基因重组原核表达质粒的构建及表达

作     者：武悦 许会会 徐一鸣 王楠 王泽宇 杨莲花 鲁中爽 蔡维北 吕忠蕾 李霜 WU Yue;XU Hui-hui;XU Yi-ming;WANG Nan;WANG Ze-yu;YANG Lian-hua;LU Zhong-shuang;CAI Wei-bei;LV Zhong-lei;LI Shuang

作者机构：吉林元和元生物工程有限公司吉林长春130102 吉林省疫病预防控制中心吉林长春130102 

基　　金：吉林省下拨省级医药健康产业发展专项(KCW-201802) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2021年第34卷第6期

页      码：694-698页

摘      要：目的构建非洲猪瘟多基因家族MGF-505-3R基因重组原核表达质粒,并进行表达。方法根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)MGF-505-3R基因CDS区序列设计特异性引物并进行PCR扩增,将目的基因片段与原核表达载体pET-32A(+)连接,构建重组原核表达质粒pET-32A(+)-MGF-505-3R。对蛋白进行生物信息学分析后,将重组原核表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,用1 mmol/L IPTG于37℃诱导表达6 h后,超声破碎菌体,获得的上清液经Ni-NTA亲和层析和CMSepharose FF阳离子交换层析纯化,BCA法测定蛋白产量。结果重组原核表达质粒经菌液PCR、双酶切及测序证明构建正确。MGF-505-3R蛋白为不稳定的疏水蛋白,为跨膜蛋白,蛋白二级结构由无规卷曲、α螺旋和β折叠组成为主要结构,三级结构预测结果与二级结构预测相符。表达的重组蛋白相对分子质量约为33000,BCA法测定重组蛋白产量可达19.8 mg/L。结论成功构建了MGF-505-3R基因重组原核表达质粒,表达并纯化了重组蛋白,为我国非洲猪瘟免疫血清学诊断试剂的制备及预防控制奠定了基础。

主 题 词：非洲猪瘟 MGF-505-3R基因 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 0905[农学-林学类] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.003360

馆 藏 号：203103605...