小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因表达检测及真核表达载体构建

作     者：沈丽佳 方唯意 谢思明 何滢 蒋会勇 赵彤 SHEN Li-jia;FANG Wei-yi;XIE Si-ming;HE Ying;JIANG Hui-yong;ZHAO Tong

作者机构：南方医科大学南方医院病理科广东广州510515 

基　　金：广东省自然科学基金(020024)~~ 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2006年第26卷第2期

页      码：144-149页

摘      要：目的检测及克隆小鼠B淋巴瘤A20细胞株mCD99L2基因,构建真核表达载体。方法设计寡核苷酸探针,应用原位分子杂交方法检测A20细胞中mCD99L2基因的mRNA表达,RT-PCR法从A20细胞总RNA中获取mCD99L2 基因含编码区全长cDNA,克隆入T载体,筛选阳性克隆、酶切鉴定并经序列测定;设计含酶切位点的PCR引物,PCR 获取含mCD99L2基因编码区片段,用限制性内切酶EcoR I和Xho I双酶切取所需目的片段,利用分子克隆技术与 pcDNA3．1／MycHis C(+)质粒重组,对产生的重组子进行PCR、双酶切鉴定,并经过测序证实。结果原位杂交方法检测 A20细胞中mCD99L2基因mRNA呈阳性表达;RT-PCR法成功获得mCD99L2基因编码区全长cDNA序列,DNA序列测序结果与GenBank提供的已知序列(NM-138309)比较,结果完全一致;重组质粒pcDNA3．1-mCD99L2中的插入片段经DNA测序后与GenBank中mD99L2基因相应序列比较,100％同源。结论小鼠B淋巴瘤A20细胞株存在 mCD99L2基因,采用RT-PCR和T-A技术克隆了A20细胞的mCD99L2基因,成功构建了pcDNA3．1-mCD99L2真核表达载体,为下一步探索mCD99L2基因在小鼠B淋巴瘤A20细胞株中的功能奠定了实验基础。

主 题 词：淋巴瘤 A20细胞株 mCD99L2 基因克隆 真核表达载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1673-4254.2006.02.003

馆 藏 号：203103960...