介导MDR1的RNAi腺病毒载体的构建

作     者：张志云 郑启昌 戴宗晴 张有顺 邹灿 黄玲 王菊 ZHANG Zhi-yun;ZHENG Qi-chang;DAI Zong-qing;ZHANG You-shun;ZOU Can;HUANG Ling;WANG-Ju

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科武汉430022 郧阳医学院附属东风总医院肝胆外科研究所 

基　　金：湖北省教育厅资助项目(2004D006) 

出 版 物：《肿瘤防治研究》 (Cancer Research on Prevention and Treatment)

年 卷 期：2006年第33卷第11期

页      码：798-801页

摘      要：目的介导MDR1的RNAi腺病毒载体,探讨RNA干扰MDR1基因对人肝癌细胞的作用。方法根据MDR1mRNA序列构建表达MDR1mRNA特异的shRNA的腺病毒穿梭质粒pshuttle-MDR1。与腺病毒载体体内重组为pAd-MDR1后转染人肝癌细胞SMMC-7721,以FCM检测细胞表面膜蛋白P-gp表达阳性率,以共聚焦显微镜检测细胞内Rh123的潴留,WesternBlot检测P-gp蛋白量的变化。结果构建成pshuttle-MDR1经限制性酶切和PCR证实与设计一致,将pAd-MDR1转染肝癌细胞SMMC-7721后,FCM检测细胞表面膜蛋白P-gp表达阳性率为22.9%和30.8%,远低于对照组(85.8%)。WesternBlot经病毒感染的SMMC-7721/R的P-gp含量明显低于对照SMMC-7721/R,而与SMMC-7721/S细胞接近。结论成功构建了pshuttle-MDR1腺病毒载体,并有效干扰了肝癌细胞细SMMC-7721MDR1的表达。

主 题 词：RNAi 肝癌细胞 多药耐药基因 腺病毒载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3971/j.issn.1000-8578.2006.11.006

馆 藏 号：203103983...