链霉菌查尔酮合成酶基因克隆及原核表达载体构建

作     者：肖静 吕玉红 李园园 陈雪梅 彭廷文 周春伶 曾令荣 保玉心 凌锌 岳昌武 

作者机构：遵义医学院形态学实验室贵州遵义563000 遵义医学院贵州省微生物资源及药物开发特色重点实验室贵州遵义563000 

基　　金：国家自然科学基金项目(31160004) 贵州省科学技术基金项目(黔科合J字2156号) 贵州省科学技术基金项目(黔科合J字2348号) 

出 版 物：《重庆文理学院学报（社会科学版）》 (Journal of Chongqing University of Arts and Sciences（Social Sciences Edition))

年 卷 期：2013年第32卷第3期

页      码：66-69页

摘      要：根据Genbank数据库已知的链霉菌的查尔酮合成酶基因的保守区设计chs基因特异简并引物,土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该1条chs基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明:该基因为放线菌来源chs基因.分别在该基因5 末端和3 末端分别引入的限制酶NcoI和EcoR I酶切位点,利用上述2种限制酶分别酶切导入到psimple-T/chs载体和原核表达pET32a,凝胶回收目的片段后,将二者连接并转化大肠杆菌感受态细胞,转化子经菌液PCR筛选、双酶切鉴定后,3730测序结果表明,该基因全长编码区为1089 bp,推测该基因编码全长为362个氨基酸残基,等电点(PI)为5.41、分子量为3 965道尔顿含有CHS保守功能区的酸性蛋白质.分析表明,该基因与Streptomyces lividans来源的查尔酮合成酶RppA基因核苷酸相似性高达93﹪,氨基酸序列相似性高达87.70﹪.测序结果表明,该基因已经成功插入到pET32a载体中.

主 题 词：查尔酮合成酶 土壤总DNA 基因克隆 原核表达 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

D　O　I：10.19493/j.cnki.issn1673-8004.2013.03.019

馆 藏 号：203104064...