携带大鼠ICAM-1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

作     者：潘浩 温端改 欧阳骏 侯建全 浦金贤 

作者机构：苏州大学附属第一医院泌尿外科215006 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2009年第35卷第6期

页      码：705-707页

摘      要：目的探讨携带大鼠细胞间黏附分子1(ICAM-1)核糖核酸干扰(RNAi)的重组慢病毒构建方法,筛选出基因抑制效率最高的重组慢病毒。方法(1)根据基因序列,设计并合成针对4个靶点的寡核苷酸,将其与双链DNAoligo进行连接反应;将连接产物转化DH5α大肠杆菌,PCR筛选获得阳性克隆并进行基因测序。(2)将重组载体与病毒包装质粒共转染人胚肾293T细胞,获得病毒颗粒。(3)重组慢病毒体外转染NRK细胞,以RT-PCR法筛选出基因抑制效率最高的重组慢病毒。结果(1)经过酶切、连接、转化后获得阳性克隆;基因测序结果完全正确。(2)经RT-PCR证实,3号病毒在感染复数(MOI)=50时,基因抑制率即达到88.4%。结论成功构建了含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的大鼠ICAM-1RNAi慢病毒载体。

主 题 词：核糖核酸干扰 细胞间黏附分子1 慢病毒 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100215[100215] 10[医学] 

D　O　I：10.19460/j.cnki.0253-3685.2009.06.037

馆 藏 号：203104076...