转录因子E2F-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

作     者：王晓通 李雷 钱倩 谢玉波 肖强 

作者机构：广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科南宁530021 广西医科大学第一附属医院麻醉科南宁530021 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30860273) 

出 版 物：《广西医科大学学报》 (Journal of Guangxi Medical University)

年 卷 期：2010年第27卷第2期

页      码：165-168页

摘      要：目的:构建细胞周期相关转录因子E2F-1RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体。方法:选取E2F-1基因的19nt特异性序列,设计针对E2F-1的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒表达载体中,XbaI和NotI进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下将慢病毒的混合包装载体质粒和包含E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体共转染293FT细胞,包装成病毒48h后,收集病毒颗粒,孔稀释法测定病毒滴度。结果:双酶切证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确;293FT细胞包装E2F-1基因RNAi的重组慢病毒载体成功;收集的细胞培养上清液中,病毒的滴度为5×107TU/mL。结论:成功构建人E2F-1基因RNAi慢病毒载体,为研究E2F-1对于胃癌生长的影响提供了稳定的转染细胞载体。

主 题 词：慢病毒载体 E2F-1 RNAi 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-930X.2010.02.001

馆 藏 号：203104113...