正交设计优化山野豌豆SRAP-PCR反应体系与引物筛选

作     者：刘颖 王显国 张巨明 刘芳 LIU Ying;WANG Xian-gou;ZHANG Ju-ming;LIU Fang

作者机构：华南农业大学农学院广东广州510642 中国农业大学动物科技学院北京100193 全国畜牧总站北京100193 

基　　金：十二五国家科技支撑项目(2011BAD17B01-02)资助 

出 版 物：《草业学报》 (Acta Prataculturae Sinica)

年 卷 期：2012年第21卷第5期

页      码：325-330页

摘      要：采用正交试验设计,以山野豌豆叶片DNA为模板,从Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对山野豌豆SRAP-PCR反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了山野豌豆的SRAP-PCR最佳反应体系。结果表明,山野豌豆SRAP-PCR最佳反应体系为:2μL 10×PCR buffer(不含Mg2+)、30ng的模板DNA、引物2.0μmol/L、Mg2+2.0mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、dNTP 0.2mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以引物浓度影响最大,dNTP浓度的影响最小。运用该体系对3份山野豌豆种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从98对SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的20对引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为SRAP分子标记技术进行山野豌豆分子遗传学研究奠定了基础。

主 题 词：山野豌豆 SRAP PCR体系优化 正交设计 引物筛选 

学科分类：090503[090503] 0909[0909] 0905[农学-林学类] 09[农学] 

核心收录：

馆 藏 号：203104230...