猪环曲病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

作     者：周璐 周远成 魏浩澈 付梦瑾 刘骁 季洪伟 朱玲 徐志文 郭万柱 

作者机构：四川农业大学动物生物技术中心四川雅安625014 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川雅安625014 

基　　金：四川省科技支撑计划项目(2012NZ0001) 四川农业大学优秀硕士学位论文培育基金项目 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2013年第43卷第9期

页      码：952-957页

摘      要：根据GenBank中猪环曲病毒（porcine torovirus,PToV）N基因的保守序列,设计合成1对针对PToV的特异性引物,建立了基于SYBR GreenⅡ检测PToV的实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能很好地将PToV与猪伪狂犬病病毒、猪嵴病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、沙门菌和大肠杆菌区分开来,特异性强。检测PToV的N基因在8.65×101~8.65×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,其扩增相关系数为0.998 9,扩增产物的熔解曲线分析只有1个单特异峰。所建立的实时荧光定量RT-PCR方法组内变异系数为0.29%~1.30%,组间变异系数为0.45%~1.80%,重复性较好。利用该方法对采集自四川部分地区的43份临床样品进行检测,实时荧光定量RTPCR检出13份阳性样品,与常规PCR检测方法的阳性符合率为100%。结果表明建立的实时荧光定量RT-PCR方法特异性较强、灵敏度高,可用于该病的临床检测和流行病学调查。

主 题 词：猪环曲病毒 SYBR GreenⅡ 实时荧光定量RT-PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2013.09.016

馆 藏 号：203104230...