甲基营养菌MP688葡萄糖脱氢酶基因分离鉴定及性质研究

作     者：王文溪 葛欣 韩月梅 熊向华 汪建华 张景海 张惟材 WANG Wen-Xi;GE Xin;HAN Yue-Mei;XIONG Xiang-Hua;WANG Jian-Hua;ZHANG Jing-Hai;ZHANG Wei-Cai

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100071 沈阳药科大学辽宁沈阳110016 

基　　金：国家自然科学基金(31100024) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2013年第24卷第6期

页      码：805-809页

摘      要：目的:鉴定甲基营养菌MP688中的葡萄糖脱氢酶基因。方法:对甲基营养菌MP688基因组序列进行比对和分析,找到与已知细菌葡萄糖脱氢酶同源性最高的基因序列mpq_2164,且该基因所编码蛋白经分析具有跨膜结构域。设计引物扩增mpq_2164和缺失跨膜区域序列的s-mpq_2164,将PCR产物克隆到表达载体pET-15b上,在大肠杆菌BL21中完成异源重组表达,然后通过组氨酸标签镍柱亲和层析纯化,采用DCIP法测定葡萄糖脱氢酶的活力。结果:分离了甲基营养菌MP688中的葡糖糖脱氢酶基因,并实现了s-mpq_2164的高效异源重组表达;MPQ_2164的氨基酸序列与已知的葡萄糖脱氢酶相似性很低,但酶活测定结果表明S-MPQ_2164具有很高的葡糖糖脱氢酶活性。结论:MPQ_2164是一个依赖于吡咯喹啉醌的葡萄糖脱氢酶,去掉跨膜结构域有利于该蛋白的异源表达。

主 题 词：葡糖糖脱氢酶 甲基营养菌 表达纯化 吡咯喹啉醌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2013.06.012

馆 藏 号：203104309...