NNMT基因启动子双荧光素酶报告系统的构建及其与SND1靶向关系的验证

作     者：卢鑫 任媛媛 葛林 杨洁 何津岩 付晓 LU Xin;REN Yuan-yuan;GE Lin;YANG Jie;HE Jin-yan;FU Xiao

作者机构：天津医科大学基础医学院细胞生物学系天津300070 天津医科大学总医院检验科天津300052 天津医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系天津300070 天津医科大学基础医学院生理学与病理生理学系天津300070 

基　　金：国家自然科学基金(31501056) 天津市教委科研计划项目(2019KJ171) 天津市自然科学基金(18JCYBJC93800) 

出 版 物：《天津医科大学学报》 (Journal of Tianjin Medical University)

年 卷 期：2021年第27卷第4期

页      码：413-418页

摘      要：目的:构建尼克酰胺-N-甲基转移酶(NNMT)启动子区的双荧光素酶报告质粒并检测其活性,从而验证SND1蛋白对NNMT基因的调控作用。方法:根据NNMT基因启动子区上、下游-1500至+200区间的序列设计引物,并以HepG2细胞提取的RNA逆转录得到cDNA为模板进行PCR扩增,得到的NNMT启动子区片段经酶切后连接到双荧光素报告载体GLuc-ONTM启动子报告克隆中,得到Gluc-NNMT启动子重组质粒,分别与pLVX-IRES-Puro-Flag-SND1质粒和pLVX-IRES-Puro-vector质粒共同转染HeLa细胞,并检测启动子活性。然后用免疫共沉淀的方法验证NNMT蛋白是否与SND1蛋白之间存在相互作用。结果:重组质粒构建成功。双荧光素酶活性实验显示,共转染Gluc-NNMT启动子重组质粒和pLVX-IRES-Puro-Flag-SND1过表达质粒的实验组与对照组相比,NNMT启动子区活性明显增强。结合免疫共沉淀实验结果,证明NNMT与SND1存在相互作用。结论:成功构建了NNMT启动子双荧光素酶报告质粒,SND1对NNMT启动子活性有增强作用,SND1与NNMT蛋白之间存在相互作用。

主 题 词：NNMT SND1 双荧光素酶报告基因 免疫共沉淀 蛋白相互作用 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203104490...