环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测HPV16及HPV58方法的建立

作     者：黄月明 牟颖 周骏 毕瑩 张智琪 陈星湘 吴青青 HUANG Yue-ming;MU Ying;ZHOU Jun;BI Ying;ZHANG Zhi-qi;CHEN Xing-xiang;WU Qing-qing

作者机构：贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 浙江大学工业控制技术国家重点实验室智能系统与控制研究所分析仪器研究中心 贵州医科大学附属医院临床检验中心 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.31460236) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2021年第16卷第6期

页      码：624-629页

摘      要：目的将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)联合应用,建立一种快速、可视化的HPV16、HPV58检测方法。方法运用LAMP在线引物设计软件,针对HPV16E6基因及HPV58L1基因保守区域设计引物及探针。采用生物素标记LF,荧光基团FAM和淬灭基团BHQ-1标记探针,LFD进行目视检测,建立HPV16和HPV58的LAMP-LFD检测方法,并对其特异性、灵敏度及临床实用性进行验证。将临床样品使用该方法的检测结果与实时LAMP扩增及qPCR结果相比较,计算符合率。结果优化的LAMP最佳反应温度为63℃,最佳反应时间为50min。LFD检测仅需5min,故完成检测耗时仅55min;建立的LAMP-LFD方法能特异性检出HPV16、HPV58,其他5种常见高危型HPV呈阴性反应;该方法针对HPV16和HPV58的检测灵敏度均为100拷贝/μl,50份临床样品检测结果与实时LAMP和qPCR检测的符合率达100%。结论建立的HPV16、HPV58LAMP-LFD检测体系快速、简便,可视化。该方法对设备的要求低,仅需恒温孵育器即可完成,结果易观察,适用于现场HPV检测,以及经济落后和资源匮乏地区的HPV筛查。

主 题 词：横向流动试纸条 环介导等温扩增技术 人乳头瘤病毒 快速检测 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13350/j.cjpb.210602

馆 藏 号：203104519...