微小RNA-296在兔增生性瘢痕中的表达及对人成纤维细胞的作用

作     者：郭冰玉 林枫 白泽明 陶凯 王洪一 Guo Bingyu;Lin Feng;Bai Zeming;Tao Kai;Wang Hongyi

作者机构：北部战区总医院烧伤整形科沈阳110016 

基　　金：国家自然科学基金青年科学基金项目 (82002047) 

出 版 物：《中华烧伤杂志》 (Chinese Journal of Burns)

年 卷 期：2021年第37卷第8期

页      码：725-730页

摘      要：目的探讨微小RNA-296(miR-296)在兔增生性瘢痕中的表达及对人成纤维细胞(HFb)的作用。方法采用实验研究方法。将12只雌雄不限成年新西兰长耳兔按完全随机法分为正常对照组和瘢痕组,每组6只。瘢痕组根据文献制作兔耳增生性瘢痕模型,正常对照组兔不行任何处理。于瘢痕组建模后60 d,采用苏木精-伊红染色法观察2组兔耳瘢痕/皮肤组织中成纤维细胞(Fb)生长与排列,采用实时荧光定量反转录PCR法检测2组兔耳瘢痕/皮肤组织中miR-296和转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达量,另对miR-296与TGF-β1mRNA表达量的相关性进行Pearson回归分析。取2批HFb,第1批分为TGF-β1野生型+miR-296阴性对照组和TGF-β1野生型+miR-296模拟物组,第2批分为TGF-β1突变型+miR-296阴性对照组和TGF-β1突变型+miR-296模拟物组,分别转染对应的序列。转染后48 h,采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测每组细胞TGF-β1的荧光素酶和肾荧光素酶的表达,以其比值反映基因表达水平。取2批HFb,每批细胞均分为miR-296阴性对照组和miR-296模拟物组,分别转染对应序列。第1批细胞转染后0(即刻)、12、24、36、48 h,采用噻唑蓝法检测细胞增殖情况。第2批细胞转染后24 h,采用蛋白质印迹法检测细胞中TGF-β1和Ⅰ型胶原蛋白表达情况。细胞实验中样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、独立样本t检验。结果瘢痕组建模后60 d,瘢痕组兔耳瘢痕组织中Fb过度增生且排列紊乱,正常对照组兔耳皮肤组织中Fb生长与排列无异常;瘢痕组兔耳瘢痕组织中miR-296的mRNA表达量(0.65±0.11)显著低于正常对照组兔耳皮肤组织(1.19±0.12,t=5.175,P0.05)。miR-296模拟物组细胞增殖能力在转染后12、24、36、48 h明显低于miR-296阴性对照组(t=3.275、11.980、10.460、17.260,P<0.05或P<0.01)。转染后24 h,miR-296阴性对照组细胞TGF-β1和Ⅰ型胶原的蛋白表达量均明显高于miR-296模拟物组(t=3.758、29.390,P<0.05或P<0.01)。结论兔增生性瘢痕中miR-296表达下调,miR-296能够通过下调TGF-β1的表达抑制HFb的增殖和Ⅰ型胶原蛋白的表达。

主 题 词：瘢痕 成纤维细胞 转化生长因子β1 微小RNA 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.cn501120-20210420-00142

馆 藏 号：203104614...